En quoi la microscopie à fluorescence diffère de la microscopie laser confocale
Microscope à fluorescence
1. Un microscope à fluorescence utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour éclairer l'objet inspecté afin de le faire émettre de la fluorescence, puis observer la forme et l'emplacement de l'objet sous le microscope. La microscopie à fluorescence est utilisée pour étudier l'absorption et le transport de substances dans les cellules, ainsi que la distribution et le positionnement des substances chimiques. Certaines substances présentes dans les cellules, comme la chlorophylle, peuvent devenir fluorescentes après avoir été irradiées par des rayons ultraviolets ; certaines substances elles-mêmes ne peuvent pas émettre de fluorescence, mais si elles sont colorées avec des colorants fluorescents ou des anticorps fluorescents, elles peuvent devenir fluorescentes après irradiation par des rayons ultraviolets. La microscopie à fluorescence est l'un des outils de recherche qualitative et quantitative sur ces substances.
2. Principe du microscope à fluorescence :
(A) Source de lumière : La source de lumière émet une lumière de différentes longueurs d’onde (de l’ultraviolet à l’infrarouge).
(B) Source de lumière à filtre d'excitation : transmet la lumière d'une longueur d'onde spécifique qui peut provoquer la fluorescence de l'échantillon, tout en bloquant la lumière inutile pour stimuler la fluorescence.
(C) Échantillons fluorescents : généralement colorés avec des pigments fluorescents.
(D) Filtre de blocage : bloque la lumière d'excitation qui n'est pas absorbée par l'échantillon et transmet sélectivement la fluorescence. Certaines longueurs d'onde de la fluorescence sont également transmises sélectivement. Un microscope qui utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour provoquer la fluorescence de l'objet éclairé. Le microscope électronique a été assemblé pour la première fois en 1931 à Berlin, en Allemagne, par Knorr et Hallowska. Ce microscope utilise un faisceau d'électrons à grande vitesse au lieu d'un faisceau lumineux. Étant donné que la longueur d'onde du flux électronique est beaucoup plus courte que celle de la lumière, le grossissement du microscope électronique peut atteindre 800,000 fois et la limite de résolution minimale est de 0,2 nanomètre. Le microscope électronique à balayage, utilisé depuis 1963, permet de voir les minuscules structures à la surface des objets.
3. Champ d'application : utilisé pour agrandir les images de petits objets. Généralement utilisé dans l'observation de la biologie, de la médecine, des particules microscopiques, etc.
microscope confocal
1. Le microscope confocal ajoute une semi-lentille semi-réfléchissante au chemin optique de la lumière réfléchie, qui réfracte la lumière réfléchie qui a traversé la lentille vers d'autres directions. Il y a un déflecteur avec un trou d'épingle à son foyer, et le trou d'épingle est situé au point focal, derrière le déflecteur, se trouve un tube photomultiplicateur. On peut imaginer que la lumière réfléchie avant et après la focalisation de la lumière de détection traverse ce système confocal et ne peut pas être focalisée sur le petit trou, et sera bloquée par le déflecteur. Ainsi, ce que mesure le photomètre, c'est l'intensité de la lumière réfléchie au foyer.
2. Principe : Les microscopes optiques traditionnels utilisent des sources lumineuses de champ, et l'image de chaque point de l'échantillon sera perturbée par la diffraction ou la lumière dispersée des points adjacents ; Les microscopes confocaux à balayage laser utilisent des faisceaux laser pour former des sources de lumière ponctuelles à travers des trous d'épingle éclairants pour éclairer l'intérieur de l'échantillon. Chaque point du plan focal est balayé et le point éclairé sur l'échantillon est imagé au niveau du trou d'épingle de détection, qui est reçu point par point ou ligne par ligne par le tube photomultiplicateur (PMT) ou le dispositif de couplage à froid (cCCD) derrière la détection. sténopé, et est rapidement une image fluorescente se forme sur l’écran de l’ordinateur. Le sténopé d'éclairage et le sténopé de détection sont conjugués par rapport au plan focal de l'objectif. Les points sur le plan focal sont focalisés simultanément sur le sténopé d'éclairage et le sténopé d'émission. Les points situés en dehors du plan focal ne seront pas imagés au niveau du sténopé de détection. Ceci est obtenu. Les images confocales sont des coupes optiques de spécimens, surmontant les défauts des images floues dans les microscopes ordinaires.
3. Domaines d'application : impliquant la médecine, la recherche scientifique animale et végétale, la biochimie, la bactériologie, la biologie cellulaire, l'embryologie tissulaire, la science alimentaire, la génétique, la pharmacologie, la physiologie, l'optique, la pathologie, la botanique, les neurosciences, la biologie marine et la science des matériaux, la science électronique. , mécanique, géologie pétrolière, minéralogie.
