Mesure du volume des blocs de tissus à l'aide de microscopes biologiques
Jusqu'à présent, la cryofixation, les coupes ultra fines-congelées et la lyophilisation-sont des méthodes de routine pour la microscopie à rayons X des tissus et des cellules-. Veuillez fournir les détails suivants concernant cette méthode :
Un microscope biologique équipé d'un projecteur peut déplacer le projecteur de haut en bas pour obtenir une luminosité modérée, et l'ouverture de l'ouverture variable peut également être modifiée pour obtenir une luminosité modérée. Si la lumière provient du soleil, le projecteur peut être surélevé de manière appropriée et l'ouverture de la lumière variable peut être agrandie de manière appropriée. Si la lumière est trop forte, le projecteur peut être abaissé de manière appropriée et l'ouverture de l'intersection peut être réduite de manière appropriée. Si vous vous sentez toujours éblouissant dans cette situation, vous pouvez choisir de placer un filtre approprié sur le support sous le projecteur. Ce chêne peut atteindre une luminosité qui vous satisfait. Bien entendu, le réglage des positions supérieure et inférieure du projecteur peut modifier la taille de l'ouverture de la lecture de la lumière et sélectionner des filtres appropriés, ce qui nécessite une certaine période de pratique et d'expérience.
Un problème très important en microscopie biologique est le processus d’échantillonnage et d’isolement des cellules. Après lyophilisation-et inclusion de résine (FD), les sections ultrafines congelées-doivent être soigneusement traitées pour garantir que la teneur en 65 éléments de chaque pièce n'est pas endommagée pendant l'observation et l'analyse. En raison des nombreuses étapes et du coût élevé impliqués dans la microanalyse aux rayons X-, il est regrettable de tirer des conclusions erronées si les cellules analysées sont endommagées ou mortes après un traitement prolongé et en plusieurs-étapes. Les cellules myocardiques séparées par traitement à la gélatinase ont deux formes, l'une en forme de long bâtonnet- et l'autre est circulaire. Ce dernier fait référence aux cellules mourantes qui sont endommagées pendant le processus de séparation cellulaire.
Le contenu et la répartition des électrolytes dans ces deux types de cellules sont très différents au microscope biologique. Na est très élevé et K est extrêmement faible dans les cardiomyocytes circulaires, et la concentration de Ca dans les dendrites linéaires est très élevée. Après vérification avec d'autres méthodes analytiques, il a été prouvé que la teneur élevée en Na et la faible teneur en K dans les cellules circulaires et la teneur élevée en Ca dans les mitochondries sont le résultat de dommages membranaires lors de la séparation cellulaire. La méthode de fixation à froid des cellules et des tissus implique souvent d’abord de les tremper puis de les stocker dans de l’azote liquide. La fixation par trempe est cruciale pour l’effet de conservation. Les cellules vivantes ou les tissus frais sont riches en eau et, lorsqu'elles sont trempées, les parties des cellules ou des tissus qui entrent en contact direct avec le réfrigérant (en particulier lors de l'utilisation de l'azote liquide pour le refroidissement) sont souvent gelées et fixées en premier, formant une « coquille » qui empêche la partie centrale des cellules d'être écrasée et fixée. Par conséquent, lors de la microanalyse aux rayons X-, on constate souvent que des cristaux de glace existent dans la partie centrale des cellules plus grandes. Pour éviter que cette situation ne se produise, une substance dont le point de fusion est supérieur à l'azote liquide mais inférieur de 806 °C est utilisée comme réfrigérant. Il existe de nombreuses substances de ce type, mais elles sont faciles à obtenir et la plus abordable est le propane concentré (point d'ébullition 42,120c, point de fusion 187,10c, poids moléculaire 44,1), qui a également une vitesse de refroidissement rapide. Mais son inconvénient est qu’il est inflammable.
