Préparation et observation d'échantillons biologiques pour microscopes électroniques
La résolution d'un microscope dépend de la longueur d'onde de la lumière utilisée. Le microscope électronique, apparu en 1933, atteignait une résolution nettement supérieure à celle d'un microscope optique grâce à l'utilisation de faisceaux d'électrons avec des longueurs d'onde beaucoup plus courtes que la lumière visible comme sources lumineuses. Les différentes sources lumineuses déterminent également une série de différences entre les microscopes électroniques et les microscopes optiques.
Sur la base des différences dans les principes de l’imagerie par faisceau électronique et dans la manière dont ils agissent sur les échantillons, les microscopes électroniques modernes se sont développés en de nombreux types. Actuellement, les microscopes électroniques à transmission et les microscopes électroniques à balayage sont les plus couramment utilisés. Le premier a un grossissement total qui peut varier entre 1 000 et 1 000 000 de fois, tandis que le second a un grossissement total qui peut varier entre 20 et 300 000 fois. Cette expérience introduit principalement la préparation de deux types d'échantillons au microscope, la microscopie électronique à transmission et la microscopie électronique à balayage.
2, équipement
1. La souche Escherichia coli est inclinée.
2. Solution ou réactif : acétate de pentyle, acide sulfurique concentré, éthanol anhydre, eau stérile, solution aqueuse à 2 % de phosphotungstate de sodium (pH 6,5-8,0), solution à 0,3 % de polyvinylformaldéhyde (dissous dans le chloroforme), cytochrome c, acétate d'ammonium, plasmide pBR322.
3. Les instruments ou autres outils comprennent des microscopes optiques ordinaires, des filets de cuivre, des entonnoirs en porcelaine, des béchers, des boîtes de Pétri, des compte-gouttes stériles, des pincettes stériles, des épingles, des lames de verre, des plaques de comptage, des machines de revêtement sous vide, des séchoirs de points critiques, etc.
3, étapes de fonctionnement
(1) Préparation et observation d'échantillons pour la microscopie électronique à transmission
1. Traitement du treillis métallique
L'échantillon d'un microscope optique est placé sur une lame de verre pour observation. Cependant, dans un miroir de transmission, étant donné que les électrons ne peuvent pas pénétrer dans la feuille de verre, un matériau maillé ne peut être utilisé que comme support, communément appelé treillis porteur. Le treillis porteur peut être divisé en diverses spécifications en raison de différents matériaux et formes, parmi lesquels un treillis en cuivre de 200 à 400 mailles (nombre de trous) est couramment utilisé. Le treillis en cuivre doit être traité avant utilisation pour éliminer toute saleté et le garder propre, sinon cela affectera la qualité du film de support et la clarté des photos des échantillons. Le maillage en cuivre de 400 mesh utilisé dans cette expérience peut être traité par la méthode suivante : d'abord, tremper et flotter avec de l'acétate de pentyle pendant quelques heures, puis rincer plusieurs fois avec de l'eau distillée, et enfin immerger et faire flotter le maillage en cuivre dans de l'éthanol anhydre pour la déshydratation. Si le treillis en cuivre n'est toujours pas propre après les méthodes ci-dessus, il peut être trempé dans de l'acide sulfurique concentré dilué (1:1) pendant 1 à 2 minutes, ou bouilli dans une solution de NaOH à 1 % pendant quelques minutes, rincé plusieurs fois avec de l'eau distillée, puis déshydraté dans de l'éthanol anhydre pour une utilisation ultérieure.
