Préparation et observation d'échantillons biologiques pour la microscopie électronique
La résolution du microscope dépend de la longueur d'onde de la lumière utilisée, le microscope électronique a commencé à apparaître en 1933 en raison de l'utilisation d'une longueur d'onde beaucoup plus courte que la lumière visible du faisceau d'électrons comme source de lumière, de sorte que la résolution qu'il peut réaliser que le microscope optique grandement amélioré. Les différentes sources de lumière déterminent également une série de différences entre le microscope électronique et le microscope optique.
Selon les différences dans le principe d'imagerie du faisceau électronique et le rôle de l'échantillon dans les différentes voies, le microscope électronique moderne a été développé pour former un certain nombre de types, à l'heure actuelle * le microscope électronique à transmission et le microscope électronique à balayage sont couramment utilisés. microscope, le premier peut être dans la plage de 1,000-1,000,000 fois le grossissement total de la plage de changements, le second peut être dans le grossissement total du { {4}},000 fois le grossissement total des changements entre les deux. Cette expérience se concentre sur la préparation d’échantillons pour les deux types de microscopes, le microscope électronique à transmission et le microscope électronique à balayage.
Matériaux
1. Filtrer Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) en biais.
2. Solutions ou réactifs Acétate d'amyle, acide sulfurique concentré, éthanol anhydre, eau stérile, solution aqueuse d'acide phosphotungstique de sodium à 2 % (pH 6.5-8.0), 0,3 % solution de polyvinylformaldéhyde (dissous dans le trichlorométhane), cytochrome c, acétate d'ammonium, plasmide pBR322.
3. Instruments ou autres accessoires Microscope optique ordinaire, maille de cuivre, entonnoir en porcelaine, bécher, plat plat, burette stérile, pincettes stériles, lancette, lames, ** plaque de comptage, coucheuse sous vide, séchoir de point critique, etc.
Étapes de fonctionnement
(I) Préparation des échantillons et observation en microscopie électronique à transmission
1. Traitement du treillis métallique
Les échantillons destinés à la microscopie optique sont placés sur des lames pour observation. Cependant, en microscopie électronique à transmission, étant donné que les électrons ne peuvent pas pénétrer dans la feuille de verre, seul un matériau maillé peut être utilisé comme support, généralement appelé treillis porteur. Le maillage porteur peut être divisé en de nombreuses spécifications différentes en raison de différents matériaux et formes, dont le * couramment utilisé est le maillage en cuivre 200-400 (nombre de trous). Le treillis en cuivre doit être traité avant utilisation pour éliminer la saleté et le garder propre, sinon cela affectera la qualité du film de support et la clarté des photos des échantillons. Le maillage en cuivre utilisé dans cette expérience est de 400 mesh, qui peut être traité de la manière suivante : d'abord, blanchissez-le avec de l'acétate d'amyle pendant quelques heures, puis rincez-le plusieurs fois à l'eau distillée, puis blanchissez-le dans de l'éthanol anhydre pendant déshydratation. Si le treillis en cuivre utilisé par la méthode ci-dessus n'est toujours pas propre, il peut être utilisé pour diluer de l'acide sulfurique concentré (1:1) immergé pendant 1 à 2 minutes, ou dans une solution de NaOH à 1 % bouillie pendant plusieurs minutes, rincé plusieurs fois avec de l'eau distillée. , placé dans une déshydratation d'éthanol anhydre, pour être utilisé.
2. Préparation du film support
Lors de l'observation de l'échantillon, le réseau porteur doit également être recouvert d'une couche de film uniforme non structuré, sinon de petits échantillons s'échapperont des trous du réseau porteur. Cette couche de film est généralement appelée film support ou film porteur. Le film support doit être transparent aux électrons, et son épaisseur doit généralement être inférieure à 20 nm ; sous l'impact du faisceau d'électrons, le film doit également avoir un certain degré de résistance mécanique, pouvoir maintenir la stabilité de la structure et avoir une bonne conductivité thermique ; de plus, le réseau de support ne doit avoir aucune structure visible au microscope électronique, ne pas avoir de réaction chimique avec l'échantillon transporté, ne pas interférer avec l'observation de l'échantillon, et son épaisseur est généralement d'environ 15 nm. Le film support peut être constitué d'un film plastique (par exemple un film de coton réfractaire, un film de polyéthylène formaldéhyde, etc.), d'un film de carbone ou d'un film métallique (par exemple un film de béryllium, etc.). Dans des conditions de travail courantes, les exigences peuvent être satisfaites avec un film plastique, tandis que la préparation du film plastique dans le film adhésif en coton réfractaire est relativement facile, mais la résistance n'est pas aussi forte que celle du film de polyéthylène formaldéhyde.
