Plusieurs notes et conseils pour l'utilisation de la microscopie à contraste de phase
Utilisation de la microscopie à contraste de phase
1) Installez le dispositif de contraste de phase : retirez la lentille du condenseur du microscope ordinaire et installez la lentille du condenseur avec un diaphragme annulaire sur un microscope correspondant ; retirez la lentille d'objectif ordinaire du microscope et remplacez-la par une lentille d'objectif avec une plaque de phase ; remplacer l'oculaire par des oculaires de mise au point pour microscopes à contraste de phase ; des filtres verts spéciaux (parfois inutiles) sont placés à l'entrée lumineuse de la source lumineuse.
2) Alignement et mise au point de la lumière : ajustez l'oculaire de mise au point et la vis de réglage de l'épaisseur jusqu'à ce qu'un cercle blanc et un cercle noir soient clairement visibles dans le champ de vision. Le cercle noir est fixe et le cercle blanc peut être déplacé en ajustant la vis sur le dispositif de condenseur, de sorte que le cercle noir et le cercle blanc coïncident complètement. Retirez l'oculaire de mise au point et remplacez-le par l'oculaire d'origine du microscope pour vérifier.
Analyse des problèmes d'utilisation du microscope à contraste de phase
1. L'influence de l'épaisseur de l'échantillon Lors de l'observation par contraste de phase, l'épaisseur de l'échantillon doit être de 5 μm ou moins. Lorsque vous utilisez un échantillon plus épais, la couche supérieure de l'échantillon est très claire, mais la couche profonde sera floue et provoquera des interférences de déphasage. et diffusion de la lumière.
2. L'influence du verre de couverture et du verre de lame L'échantillon doit être recouvert d'un verre de couverture, sinon l'anneau brillant du diaphragme annulaire et l'anneau sombre de la plaque de phase sont difficiles à chevaucher. L'observation par contraste de phase a également des exigences élevées sur la qualité du verre de la lame de verre et du verre de couverture. Lorsqu'il y a des rayures, une épaisseur inégale ou des irrégularités, une distorsion de l'anneau lumineux et des interférences de phase se produiront. De plus, lorsque la glissière est trop épaisse ou trop fine, l'anneau brillant du diaphragme annulaire deviendra plus grand ou plus petit.
3. Halo et effet de décoloration Dans le processus d'imagerie du microscope à contraste de phase, lorsqu'une certaine structure devient sombre en raison du retard de phase, ce n'est pas la perte de lumière, mais le résultat de la redistribution de la lumière sur le plan de l'image. Ainsi, la lumière apparemment perdue dans les zones sombres apparaîtra sous la forme d'un halo lumineux autour des objets plus sombres. C'est un inconvénient de la microscopie à contraste de phase, qui gêne l'observation de structures fines, et le phénomène de halo est d'autant plus important que le diaphragme annulaire est très étroit. Un autre phénomène en microscopie à contraste de phase est l'effet d'ombrage, qui fait référence à la perte de contraste sur les bords d'une zone plus grande avec le même retard de phase lorsqu'il est observé par contraste de phase.
4. Inversion de phase Lorsque n'n, le contraste clair et sombre de l'image est juste opposé, c'est ce qu'on appelle l'inversion de phase. Il est méconnaissable lorsque la différence de phase δ=0, et le contraste devient plus grand avec l'augmentation de δ, et l'inversion de phase apparaîtra lorsque δ continue d'augmenter jusqu'à une certaine valeur. Lors de l'utilisation d'un objectif à valeur d'absorbance élevée de 90 % (contraste élevé), cette valeur de transformation est d'environ 0.55λ, et lors de l'utilisation d'un objectif d'objectif à valeur d'absorbance standard de 70 %, elle est d'environ 0,33λ . Les objectifs avec des valeurs d'absorbance plus élevées doivent être utilisés pour résoudre les petites différences de chemin optique.
