La différence entre la microscopie confocale fluorescente et laser
microscope à fluorescence
1. Le microscope à fluorescence est un appareil qui utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour éclairer l'objet testé, le faisant émettre une fluorescence, puis observer la forme et la position de l'objet sous le microscope. La microscopie à fluorescence est utilisée pour étudier l'absorption, le transport, la distribution et la localisation de substances dans les cellules. Certaines substances présentes dans les cellules, comme la chlorophylle, peuvent émettre une fluorescence après avoir été exposées à un rayonnement ultraviolet ; Certaines substances elles-mêmes peuvent ne pas émettre de fluorescence, mais si elles sont colorées avec des colorants fluorescents ou des anticorps fluorescents, elles peuvent également émettre de la fluorescence sous un rayonnement ultraviolet. La microscopie à fluorescence est l'un des outils de recherche qualitative et quantitative sur ces substances.
2. Principe du microscope à fluorescence :
(A) Source lumineuse : La source lumineuse émet de la lumière de différentes longueurs d’onde (de l’ultraviolet à l’infrarouge).
(B) Source de lumière du filtre d'excitation : transmettant la lumière d'une longueur d'onde spécifique qui peut produire une fluorescence dans l'échantillon, tout en bloquant la lumière inutile pour la fluorescence d'excitation.
(C) Échantillons fluorescents : généralement colorés avec des pigments fluorescents.
(D) Filtre bloquant : transmet sélectivement la fluorescence en bloquant la lumière d'excitation qui n'a pas été absorbée par l'échantillon, et certaines longueurs d'onde sont également transmises sélectivement en fluorescence. Un microscope qui utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour émettre la fluorescence de l'objet irradié. Le microscope électronique a été assemblé pour la première fois par Knorr et Harroska à Berlin, en Allemagne, en 1931. Ce type de microscope utilise un faisceau d'électrons à grande vitesse au lieu d'un faisceau de lumière. En raison de la longueur d'onde beaucoup plus courte du flux d'électrons par rapport aux ondes lumineuses, le grossissement du microscope électronique peut atteindre 800000 fois, avec une limite de résolution minimale de 0,2 nanomètre. Le microscope électronique à balayage, utilisé depuis 1963, permet de voir les minuscules structures à la surface des objets.
3. Champ d'application : utilisé pour agrandir les images de petits objets. Généralement utilisé pour l'observation de la biologie, de la médecine, des particules microscopiques, etc.
microscope confocal
1. Un microscope confocal ajoute une lentille semi-réfléchissante au trajet de la lumière réfléchie, qui courbe la lumière réfléchie qui a déjà traversé la lentille dans d'autres directions. Il y a un déflecteur avec un trou d'épingle à son point focal, et le petit trou est situé au point focal. Derrière le déflecteur se trouve un tube photomultiplicateur. On peut imaginer que la lumière réfléchie avant et après le point focal de la lumière de détection ne peut pas être focalisée sur le petit trou à travers ce système confocal et sera bloquée par le déflecteur. Le photomètre mesure donc l'intensité de la lumière réfléchie au point focal.
2. Principe : Les microscopes optiques traditionnels utilisent des sources lumineuses de champ, et l'image de chaque point de l'échantillon sera affectée par la diffraction ou la lumière dispersée des points voisins ; Le microscope confocal à balayage laser utilise un faisceau laser pour former une source de lumière ponctuelle à travers un sténopé éclairé afin de scanner chaque point du plan focal de l'échantillon. Le point éclairé sur l'échantillon est imagé au niveau du trou d'épingle de détection et est reçu point par point ou ligne par un tube photomultiplicateur (PMT) ou un dispositif de couplage thermoélectrique (cCCD) après le trou d'épingle de détection, formant rapidement une image fluorescente sur l'écran de l'ordinateur. écran. Le sténopé d'éclairage et le sténopé de détection sont conjugués par rapport au plan focal de l'objectif. Les points sur le plan focal sont simultanément focalisés sur le sténopé d'éclairage et le sténopé d'émission, et les points en dehors du plan focal ne seront pas imagés au niveau du sténopé de détection. Il en résulte une image confocale qui représente la section transversale optique de l’échantillon, surmontant ainsi l’inconvénient des images floues en microscopie conventionnelle.
3. Domaines d'application : impliquant la médecine, la recherche animale et végétale, la biochimie, la bactériologie, la biologie cellulaire, les tissus et les embryons, la science alimentaire, la génétique, la pharmacologie, la physiologie, l'optique, la pathologie, la botanique, les neurosciences, la biologie marine, la science des matériaux, la science électronique, mécanique, géologie pétrolière et minéralogie.
