Les principes et les caractéristiques structurelles des microscopes à fluorescence
Le microscope à fluorescence utilise une source de lumière ponctuelle très efficace pour émettre une certaine longueur d'onde de lumière (telle que la lumière ultraviolette 3650 ou la lumière bleue violette 4200) à travers un système de filtre coloré comme lumière d'excitation, qui excite les substances fluorescentes dans l'échantillon pour émettre diverses couleurs de fluorescence, puis observe à travers le grossissement de l'objectif et de l'oculaire. De cette façon, même avec une faible fluorescence dans un fond fort, il est facile à reconnaître et présente une sensibilité élevée. Il est principalement utilisé pour l’étude de la structure, de la fonction et de la composition chimique des cellules. La structure de base d'un microscope à fluorescence est composée d'un microscope optique ordinaire et de quelques accessoires tels qu'une source de lumière fluorescente, un filtre d'excitation, un séparateur de faisceau bicolore et un filtre de blocage. La source de lumière fluorescente - utilise généralement des lampes au mercure à ultra-haute pression (50-200 W), qui peuvent émettre de la lumière de différentes longueurs d'onde, mais chaque substance fluorescente a une longueur d'onde de lumière d'excitation qui produit la fluorescence la plus forte. Par conséquent, des filtres d’excitation (généralement des filtres d’excitation ultraviolets, violets, bleus et verts) doivent être ajoutés pour permettre uniquement à une certaine longueur d’onde de lumière d’excitation de traverser et d’irradier l’échantillon, tout en absorbant toute autre lumière. Après avoir été irradiée avec une lumière d'excitation, chaque substance émet une fluorescence visible avec une longueur d'onde plus longue que la longueur d'onde d'irradiation sur une très courte période de temps. La fluorescence a une spécificité et est généralement plus faible que la lumière d'excitation. Afin d'observer une fluorescence spécifique, un filtre bloquant (ou supprimant) doit être ajouté derrière l'objectif.
Ses fonctions sont doubles : premièrement, absorber et empêcher la lumière d'excitation de pénétrer dans l'oculaire pour éviter de perturber la fluorescence et d'endommager les yeux ; Deuxièmement, sélectionner et laisser passer une fluorescence spécifique, présentant une couleur fluorescente spécifique. Deux types de filtres doivent être utilisés en combinaison.
