La structure particulière d'un microscope à fluorescence comprend :
(I) Système de filtre de couleur
Le filtre coloré est une partie importante du microscope à fluorescence, ses composants principaux sont le filtre de lumière d'excitation (premier filtre barrière), le filtre de lumière d'émission (deuxième filtre barrière) et la composition mi-transparente et mi-anti-filtre (miroir à séparation de faisceau). . Différents fabricants de modèles de filtres colorés, le nom n'est souvent pas uniforme.
1. Filtre de lumière d'excitation et filtre de lumière d'émission : en fonction de la source de lumière et des caractéristiques du fluorochrome, choisissez généralement les trois types de correspondance suivants, pour fournir une certaine plage de longueurs d'onde de la lumière d'excitation et faire en sorte que l'échantillon excite la fluorescence à travers l'oculaire à l'imagerie.
Excitation UV : Le filtre de lumière d'excitation permet la transmission de la lumière UV et bloque le passage de la lumière visible au-dessus de 400 nm. Le filtre d'émission correspondant permet le passage de la lumière bleue, qui apparaît bleue dans le champ de vision, par exemple pour la coloration DAPI.
Excitation de la lumière bleue : le filtre de lumière d’excitation laisse passer la lumière bleue, bloquant ainsi les autres longueurs d’onde de la lumière. Le filtre d'émission correspondant permet le passage de la lumière verte, par exemple pour les marqueurs de coloration GFP.
Excitation verte : le filtre d'excitation laisse passer la lumière verte, bloquant les autres longueurs d'onde. Le filtre d'émission correspondant laisse généralement passer la lumière rouge, par exemple la coloration à la rhodamine.
2. Filtre mi-transparent et mi-réfléchissant : son rôle est de bloquer complètement l'excitation de la lumière par la réflexion ; et dans la plage de longueurs d'onde correspondante de la lumière émise. Son modèle correspond à l'excitation des filtres lumineux et à l'émission des filtres lumineux.
(B) objectif et oculaire
Une variété de lentilles d'objectif peuvent être appliquées, mais * bon choix de lentille d'objectif symétrique et achromatique, en raison de son autofluorescence est très petite et de ses propriétés de transmission de la lumière (plage de longueurs d'onde) adaptées à la fluorescence. Comme la luminosité de fluorescence de l'image dans le champ de vision du microscope est proportionnelle au carré de la vitesse initiale de l'objectif et inversement proportionnelle à son grossissement, afin d'améliorer la luminosité de l'image de fluorescence, l'objectif avec une vitesse initiale élevée doit être utilisé. Surtout pour la fluorescence des échantillons qui n'est pas assez forte, il faut utiliser un objectif à grand débit buccal, à transmission lumineuse élevée, avec le plus faible possible avec l'oculaire.
(C) autres appareils optiques
Réflecteur, sa couche réfléchissante est généralement plaquée aluminium, car l'aluminium absorbe moins la lumière ultraviolette et visible de la région bleu-violet, réfléchissant jusqu'à 90 % ou plus (alors que la réflectivité de l'argent n'est que de 70 %). Des réflecteurs plats sont généralement utilisés. Miroir de projecteur, conçu et fabriqué spécifiquement pour la microscopie à fluorescence. Miroir de projecteur en verre de quartz ou autre verre transparent aux UV. Dispositif de lumière tombante, qui en plus de la fonction de source de lumière transmise, est plus adapté aux échantillons opaques et translucides, tels que les films épais, les membranes filtrantes, les colonies, les cultures tissulaires et autres échantillons pour l'observation directe. Ces dernières années, le développement d'un nouveau type de microscope à fluorescence utilisant un dispositif à lumière tombante, appelé microscope à fluorescence descendante.
(D) source de lumière
De nos jours, une lampe au mercure haute pression de 50 ou 100 W est utilisée comme source de lumière. Le travail par la décharge des deux électrodes, provoqué par l'évaporation du mercure, la boule de pression de l'air augmente rapidement (ce processus prend généralement environ 5 à 15 minutes), et dans le processus d'émission de quanta de lumière, la longueur d'onde de la lumière libérée est suffisante pour exciter tous les types de substances fluorescentes sont donc couramment utilisés pour la microscopie à fluorescence.
Les lampes au mercure ont une durée de vie relativement courte, généralement 200 heures, et en réponse à cette limitation de durée de vie, ces dernières années, une nouvelle source de lumière fluorescente, X-Cite, a été largement utilisée pour sa longue durée de vie de 2 000 heures et sa flexibilité d'utilisation. - aucun préchauffage n'est requis et il est prêt à être utilisé dès la sortie de la boîte.
