La structure et les principaux composants d'un microscope à fluorescence
(1) Source lumineuse
De nos jours, une lampe au mercure ultra haute pression de 200 W est couramment utilisée comme source de lumière. Il est fait de verre de quartz, avec une forme sphérique au milieu et une certaine quantité de mercure remplie à l'intérieur. Pendant le fonctionnement, la décharge entre les deux électrodes provoque l'évaporation du mercure et la pression à l'intérieur de la sphère augmente rapidement. Lorsque le mercure s'évapore complètement, il peut atteindre 50-70 pressions atmosphériques standards, ce qui prend généralement environ 5-15 minutes. La luminescence des lampes à mercure à ultra haute pression est le résultat de la décharge entre les électrodes, qui dissocie et réduit continuellement les molécules de mercure et émet des photons. Il émet une forte lumière ultraviolette et bleu-violet, suffisante pour exciter diverses substances fluorescentes. Il est donc largement utilisé dans les microscopes à fluorescence.
Les lampes au mercure à ultra haute pression émettent également une grande quantité d’énergie thermique. Par conséquent, la salle des lampes doit avoir de bonnes conditions de dissipation thermique et la température de l’environnement de travail ne doit pas être trop élevée.
La nouvelle lampe au mercure à ultra haute pression ne nécessite pas de haute tension pour s'allumer au début de son utilisation. Après un certain temps d'utilisation, il doit être démarré avec une haute tension (environ 15 000 V). Après le démarrage, la tension de fonctionnement est généralement maintenue à 50-60 V et le courant de fonctionnement est d'environ 4 A. La durée de vie moyenne d’une lampe au mercure ultra haute pression de 200 W est d’environ 200 heures lorsqu’elle est utilisée pendant 2 heures à chaque fois. Plus la durée de fonctionnement est courte, plus la durée de vie est courte. En cas d'utilisation unique pendant 20 minutes, la durée de vie est réduite de 50 %. Par conséquent, essayez de minimiser le nombre de démarrages lors de l'utilisation. L'efficacité lumineuse d'une ampoule diminue progressivement au cours de son utilisation. Une fois le voyant éteint, il doit attendre le refroidissement avant de redémarrer. Après avoir allumé l'ampoule, elle ne doit pas être immédiatement éteinte pour éviter une évaporation incomplète du mercure et des dommages à l'électrode. Généralement, il faut attendre 15 minutes. En raison de la haute pression et du fort rayonnement ultraviolet de la lampe au mercure ultra haute pression, l'ampoule doit être placée dans la chambre de la lampe avant d'être allumée pour éviter les blessures aux yeux et l'explosion pendant le fonctionnement.
Le circuit d'une source lumineuse de lampe au mercure à ultra haute pression (100 W ou 200 W) et ses composants, y compris la transformation de tension, la suppression de courant et le démarrage. Il existe un système de réglage du centre lumineux de l'ampoule dans la salle des lampes, avec un réflecteur concave plaqué aluminium installé derrière l'ampoule et une lentille collectrice de lumière installée à l'avant.
La lampe au mercure à ultra haute pression produite dans le pays GCQ-200 a de bonnes performances et peut remplacer les ampoules importées telles que HBO-200, avec une durée de vie moyenne de plus de 200 heures et un prix relativement bas.
Un dispositif simple et portable de source de lumière fluorescente au tungstène au brome à haute température de couleur développé en Chine, avec un petit volume, un poids léger, une faible consommation, une double utilisation de AC et DC (avec alimentation DC intégrée), facile à transporter, pratique à utiliser. , a été promu et appliqué.
(2) Système de filtrage des couleurs
Le système de filtre coloré est un élément important d'un microscope à fluorescence, composé d'une plaque filtrante d'excitation et d'une plaque filtrante de compression. Le modèle de plaque filtrante est souvent incohérent selon les fabricants. Les plaques filtrantes portent généralement le nom de la tonalité de couleur de base, la première lettre représentant la tonalité de couleur, la deuxième lettre représentant le verre et le chiffre représentant les caractéristiques du modèle. Microscope Olympe
(3) Objectif
Diverses lentilles d'objectif peuvent être appliquées, mais l'utilisation de lentilles d'objectif achromatiques est adaptée à la fluorescence en raison de leur autofluorescence et de leurs performances de transmission extrêmement faibles (plage de longueurs d'onde). Du fait que la luminosité de fluorescence de l'image dans le champ de vision du microscope est directement proportionnelle au carré du rapport d'ouverture de l'objectif et inversement proportionnelle à son grossissement, afin d'améliorer la luminosité de l'image de fluorescence, un objectif avec un rapport d’ouverture plus grand doit être utilisé. Son impact est très important, surtout à fort grossissement. Par conséquent, pour les échantillons présentant une fluorescence insuffisante, il convient d'utiliser un objectif à taux d'ouverture élevé, associé à un oculaire aussi faible que possible (4 x, 5 x, 6,3 x, etc.).
(4) Miroir réfléchissant
La couche réfléchissante d'un réflecteur est généralement plaquée d'aluminium car l'aluminium absorbe moins de lumière ultraviolette et visible dans la région bleu-violet, avec une réflexion de plus de 90 %, tandis que l'argent n'en réfléchit que 70 % ; Généralement, des réflecteurs plats sont utilisés.
(5) Miroir spot
Le concentrateur conçu et fabriqué spécifiquement pour la microscopie à fluorescence est constitué de verre de quartz ou d'un autre verre transmettant la lumière ultraviolette. Il existe deux types d’observateurs de champ sombre avec un champ de vision distinct. Il existe également un concentrateur différentiel de fluorescence.
(6) Dispositif de lumière tombante
Le nouveau type de dispositif de lumière tombante reflète les parties de longueur d'onde plus courte (ultraviolet et bleu violet) de la source de lumière vers le filtre du spectrophotomètre interférentiel en raison des propriétés du revêtement du filtre. Lorsque le filtre fait face à la source lumineuse à un angle de 45 degrés. Lorsqu'il est incliné, il est dirigé verticalement vers l'objectif et dirigé vers l'échantillon à travers l'objectif, provoquant l'excitation de l'échantillon. À ce stade, l’objectif agit directement comme un condenseur. Dans le même temps, les parties longues du filtre (vert, jaune, rouge, etc.) sont transparentes pour le filtre, elles ne réfléchissent donc pas en direction de l'objectif. Le filtre agit comme une plaque filtrante d'excitation et, comme la fluorescence de l'échantillon se situe dans la région des grandes longueurs d'onde de la lumière visible, elle peut être observée à travers le filtre et atteindre l'objectif. La luminosité de l'image de fluorescence augmente avec le grossissement et est plus forte que la source de lumière transmise à fort grossissement. En plus de sa fonction de source de lumière transmissive, il est plus adapté à l'observation directe d'échantillons opaques et semi-transparents, tels que des plaques épaisses, des membranes filtrantes, des colonies, des échantillons de culture tissulaire, etc. Ces dernières années, les microscopes à fluorescence nouvellement développés ont souvent été développés. utilisez des appareils à lumière tombante, appelés microscopes à fluorescence à lumière tombante.
