Deux méthodes d'observation microscopique couramment utilisées
1, observation en champ sombre
Le champ de vision sombre est en fait un éclairage de champ sombre. Ses caractéristiques sont différentes du champ de vision clair, car il n'observe pas directement la lumière éclairante, mais plutôt la lumière réfléchie ou diffractée de l'objet inspecté. Par conséquent, le champ de vision devient un fond sombre, tandis que l'objet inspecté présente une image lumineuse.
Le principe du champ sombre est basé sur le phénomène optique de Tyndall, dans lequel les particules de poussière ne peuvent pas être observées par l'œil humain lorsqu'elles sont exposées à une lumière forte en raison de la diffraction provoquée par une lumière forte. Si la lumière est projetée obliquement dessus, les particules semblent augmenter de volume en raison de la réflexion de la lumière, les rendant visibles à l'œil humain.
L'accessoire spécial requis pour l'observation en champ sombre est un projecteur à champ sombre. Sa caractéristique est qu'il ne permet pas au faisceau de lumière de traverser l'objet de bas en haut, mais modifie le trajet de la lumière pour qu'il soit dirigé obliquement vers l'objet, de sorte que la lumière d'éclairage n'entre pas directement dans l'objectif et utilise l'image lumineuse formée par la lumière de réflexion ou de diffraction sur la surface de l'objet inspecté. La résolution de l'observation en champ sombre est beaucoup plus élevée que celle de l'observation en champ clair, atteignant jusqu'à 0,02-0,004
2, méthode d'inspection du miroir à contraste de phase
L'invention réussie de la microscopie à contraste de phase dans le développement des microscopes optiques est une réalisation importante de la technologie de microscopie moderne. Nous savons que l'œil humain ne peut distinguer que la longueur d'onde (couleur) et l'amplitude (luminosité) des ondes lumineuses. Pour les échantillons biologiques incolores et transparents, lorsque la lumière les traverse, la longueur d'onde et l'amplitude ne changent pas beaucoup, ce qui rend difficile l'observation de l'échantillon dans un champ clair.
Le microscope à contraste de phase utilise la différence de longueur de trajet optique de l'objet inspecté pour une inspection par miroir, utilisant efficacement le phénomène d'interférence de la lumière pour transformer la différence de phase qui ne peut pas être distinguée par l'œil humain en une différence d'amplitude distinguable. Même les substances incolores et transparentes peuvent devenir clairement visibles. Cela facilite grandement l'observation des cellules vivantes, c'est pourquoi la microscopie à contraste de phase est largement utilisée dans les microscopes inversés.
Le principe de base de la microscopie à contraste de phase est de convertir la différence de chemin optique de la lumière visible traversant l'échantillon en différence d'amplitude, améliorant ainsi le contraste entre diverses structures et les rendant claires et visibles. Après avoir traversé l'échantillon, la lumière subit une réfraction, s'écartant du chemin optique d'origine et étant retardée de 1/4 λ (longueur d'onde). Si la différence de chemin optique est augmentée ou diminuée de 1/4 λ supplémentaire, la différence de chemin optique devient 1/2 λ et l'interférence entre les deux faisceaux lumineux augmente ou diminue après la combinaison de l'axe, améliorant ainsi le contraste. En termes de structure, les microscopes à contraste de phase ont deux
différences particulières par rapport aux microscopes optiques ordinaires :
1. Un diaphragme annulaire est situé entre la source de lumière et le condenseur et sa fonction est de former un cône de lumière creux qui traverse le condenseur et se concentre sur l'échantillon.
2. Plaque de phase angulaire : Une plaque de phase recouverte de fluorure de magnésium est ajoutée à l'objectif, ce qui peut retarder la phase de la lumière directe ou diffractée de 1/4 λ. Il peut être divisé en deux types :
(1) . Plaque de phase A+ : retardez la lumière directe de 1/4 λ et ajoutez les deux ensembles d'ondes lumineuses après avoir combiné les axes. L'amplitude augmente et la structure de l'échantillon devient plus lumineuse que le milieu environnant, formant un contraste brillant (ou contraste négatif)
(2) . Plaque de phase B+ : retardez la lumière diffractée de 1/4 λ et soustrayez les ondes lumineuses après avoir combiné les axes de deux ensembles de rayons lumineux, ce qui entraîne une diminution de l'amplitude et forme un contraste sombre (ou contraste positif). La structure devient plus sombre que le milieu environnant
