Quel type de microscope est utilisé pour voir la forme des cellules microbiennes
Terme collectif désignant tous les organismes minuscules difficiles à observer à l'œil nu. Les micro-organismes comprennent des bactéries, des virus, des champignons et quelques algues. (Cependant, certains micro-organismes sont visibles à l'œil nu, tels que les champignons appartenant à des champignons, Ganoderma lucidum, etc.) Les virus sont un type d '«organismes non cellulaires» composés de quelques composants tels que des acides nucléiques et des protéines, mais leur la survie doit dépendre des cellules vivantes. Selon les différents environnements qui existent, ils peuvent être divisés en microorganismes procaryotes, microorganismes spatiaux, microorganismes fongiques, microorganismes levures, microorganismes marins, etc.
Le rôle et les dommages des micro-organismes:
L'un des impacts les plus importants des micro-organismes sur l'homme est la prévalence des maladies infectieuses. 50% des maladies humaines sont causées par des virus. L'histoire des microbes causant des maladies humaines est l'histoire de la lutte constante des êtres humains avec eux. Les êtres humains ont fait de grands progrès dans la prévention et le traitement des maladies, mais des infections microbiennes nouvelles et réapparaissant continuent de se produire, comme un grand nombre de maladies virales qui manquent de médicaments thérapeutiques efficaces. Le mécanisme pathogénique de certaines maladies n'est pas clair. L'abus d'un grand nombre d'antibiotiques à large spectre a provoqué une forte pression de sélection, provoquant la mutation de nombreuses souches, entraînant l'émergence de résistances aux médicaments, et la santé humaine est menacée par de nouvelles menaces. Certains virus segmentés peuvent muter par recombinaison ou réassortiment. L'exemple le plus typique est le virus de la grippe.
Après avoir connu la définition spécifique des micro-organismes, quel type de microscope l'expérimentateur doit-il utiliser lors de l'étude des micro-organismes pour voir, et quel microscope peut être utilisé pour mieux voir, et pour observer et analyser les formes microbiennes courantes.
L'invention du microscope est de pouvoir voir des objets souriants qui ne peuvent pas être vus à l'œil nu. La taille des micro-organismes est très petite, ils doivent donc être agrandis et observés à l'aide d'un microscope. De plus, il existe de nombreux types de micro-organismes, donc la plupart des microscopes optiques peuvent Pour observer les micro-organismes, la question suivante est de savoir quel type de microscope doit être utilisé pour l'observation et l'analyse des micro-organismes. Les microscopes courants pour l'observation de la morphologie microbienne comprennent les microscopes biologiques, les microscopes à contraste de phase, les microscopes inversés, les microscopes à fluorescence et les microscopes confocaux. Microscope et ainsi de suite.
Ce qui suit décrit les différents microscopes utilisés pour observer les micro-organismes :
1. Microscope optique ordinaire
La lumière naturelle ou la lumière est utilisée comme source de lumière et sa longueur d'onde est d'environ {{0}},4 μm. La résolution du microscope est la moitié de la longueur d'onde, c'est-à-dire 0,2 μm, et la plus petite image visible à l'œil nu est de 0,2 mm. Par conséquent, l'utilisation d'un miroir à huile (à immersion) pour grossir 1000 fois peut agrandir les particules de 0,2 μm en 0,2 mm visible à l'œil nu. Les microscopes optiques ordinaires peuvent être utilisés pour l'observation des bactéries, des actinomycètes et des champignons.
2. La microscopie à fond noir est couramment utilisée pour observer la morphologie et le mouvement microbiens non colorés. Une fois le condenseur à fond noir installé dans le microscope ordinaire, la lumière ne peut pas pénétrer directement du milieu et le champ de vision est sombre. Lorsque l'échantillon reçoit une lumière oblique du bord du condenseur, il peut être dispersé, de sorte que des micro-organismes brillants peuvent être observés dans le fond du champ sombre, tels que des bactéries ou des spirochètes.
3. Microscope à contraste de phase Le microscope à contraste de phase utilise l'effet lumineux de la plaque de différence de phase pour modifier la phase lumineuse et l'amplitude de la lumière directe, et convertir la différence de phase lumineuse en différence d'intensité lumineuse. Sous un microscope à contraste de phase, lorsque la lumière traverse un échantillon non coloré, la différence de phase lumineuse est causée par l'incohérence de la densité des différentes parties de l'échantillon, et la morphologie, la structure interne et le mode de mouvement des micro-organismes peuvent être observés.
4. Microscope à fluorescence Le microscope à fluorescence est fondamentalement le même que le microscope optique ordinaire, la principale différence est la source de lumière, le filtre et le condenseur. À l'heure actuelle, la plupart d'entre eux utilisent des dispositifs d'épi-lumière et des lampes au mercure à haute pression sont couramment utilisées comme sources de lumière, qui peuvent émettre de la lumière ultraviolette ou bleu-violet. Il existe deux types de filtres : le filtre d'excitation et le filtre d'absorption. En plus des condenseurs à fond clair généraux, les condenseurs à fond noir peuvent également être utilisés dans les microscopes à fluorescence utilisant la lumière bleue pour améliorer le contraste entre la fluorescence et l'arrière-plan. Cette méthode est applicable à la détection ou à l'identification de bactéries colorées avec des pigments fluorescents ou associées à des anticorps fluorescents.
5. Les microscopes électroniques utilisent le flux d'électrons comme source de lumière. Par rapport à la lumière visible, la longueur d'onde est des dizaines de milliers de fois différente, ce qui améliore considérablement la résolution. La bobine magnétique est utilisée comme système d'amplification optique et le grossissement peut atteindre des dizaines de milliers ou des centaines de milliers de fois. Il est souvent utilisé dans les particules virales. et l'observation de l'ultrastructure bactérienne.
Observation d'échantillons microbiens non colorés :
Les spécimens non colorés peuvent généralement être utilisés pour observer la morphologie, la puissance et le mouvement des bactéries. Les bactéries sont incolores et transparentes lorsqu'elles ne sont pas colorées et sont observées au microscope principalement par la différence entre l'indice de réfraction des bactéries et le milieu environnant. Les bactéries avec des flagelles se déplacent vigoureusement, tandis que les bactéries sans flagelles montrent un mouvement brownien irrégulier. Les bactéries viables telles que Treponema pallidum, Leptospira et Campylobacter ont des formes et des schémas de mouvement distinctifs, qui ont une importance diagnostique. Les méthodes couramment utilisées sont la méthode de chute de pression, la méthode de goutte pendante et la méthode capillaire.
1. Méthode de goutte suspendue Appliquez de la vaseline autour du trou concave de la lame de verre concave propre, prenez un anneau de suspension bactérienne avec une boucle d'inoculation et placez-le au centre du verre de couverture, puis alignez le trou concave de la lame de verre concave avec la gouttelette au centre du couvercle en verre et mettez le couvercle, puis retournez-le rapidement, appuyez légèrement sur la lamelle pour la faire adhérer fermement à la vaseline sur le bord du trou concave, puis observez sous une haute puissance microscope (ou fond noir).
2. Prenez un anneau de suspension bactérienne avec une boucle d'inoculation et placez-le au centre d'une lame de verre propre par la méthode de chute de pression, et couvrez doucement la suspension bactérienne avec un couvercle en verre, en prenant soin d'éviter la génération de bulles d'air et d'empêcher la suspension bactérienne de déborder. Observation en fond clair (ou fond noir) sous un objectif de forte puissance.
3. La méthode capillaire est principalement utilisée pour l'examen de la cinétique des bactéries anaérobies. Choisissez généralement une longueur de 60~70 mm. Après avoir siphonné la suspension de bactéries anaérobies à travers un capillaire avec une ouverture de 0,5-1,0 mm, sceller les deux extrémités du capillaire avec une flamme. Le capillaire a été fixé sur la lame de verre avec du papier plastique et observé sous une lentille à haute puissance en fond noir.
Observation d'échantillons microbiens colorés au microscope :
Après la coloration de l'échantillon bactérien, en raison du fort contraste de couleur entre les bactéries et le milieu environnant, les caractéristiques morphologiques des bactéries (telles que la taille, la forme, la disposition, etc.) des bactéries et certaines structures spéciales peuvent être clairement observées sous un microscope optique ordinaire (telles que capsules, flagelles, spores, etc.), et les bactéries peuvent être classées et identifiées en fonction de la réactivité de coloration.
(1) Procédure générale de coloration bactérienne La procédure générale de coloration bactérienne est la suivante : frottis (séchage) - fixation - coloration.
1. Frottis Préparation du sang, des sécrétions, des excrétions, du fluide de ponction et de la culture liquide et des frottis directs en couche mince sur des lames de verre ; l'autopsie ou des tissus animaux infectés, enduisez la lésion avec un coton-tige pour le prélèvement. Pour la préparation de colonies bactériennes ou de pelouses sur milieu solide, utiliser d'abord une anse d'inoculation pour prélever un anneau de sérum physiologique et le mettre au centre de la lame, puis utiliser une anse d'inoculation stérile pour prélever une petite quantité de culture et la broyer uniformément dans une solution saline normale, et étalez-le sur 1 cm2. Grandes ou petites surfaces peintes, laissez-le sécher naturellement à température ambiante ou séchez-le lentement à distance.
2. Le but de la fixation est de tuer les bactéries, de coaguler les protéines et la structure bactériennes et de faciliter la coloration ; favoriser l'adhésion des bactéries à la lame pour éviter d'être emportées par l'eau lors du lavage ; modifier la perméabilité des bactéries aux colorants, ce qui est bénéfique pour la structure des cellules bactériennes de la coloration. Il est généralement fixé en chauffant avec une flamme et le frottis séché est rapidement passé à travers la flamme 3 fois. Il est préférable de ne pas brûler la peau du dos de la main lorsqu'elle touche la lame.
3. Teinture Selon différents objectifs d'inspection, choisissez différentes méthodes de teinture pour la teinture. Lors de la teinture, ajoutez la solution de colorant goutte à goutte pour augmenter la couverture.
4. Mordant Toute substance qui peut augmenter l'affinité entre le colorant et l'objet teint, fixer le colorant sur l'objet teint et provoquer une modification de la perméabilité de la membrane cellulaire est appelée mordant. On utilise couramment l'alun, l'acide tannique, les sels métalliques et l'iode, etc., et le chauffage est également utilisé pour favoriser la coloration. Les mordants peuvent être utilisés entre la coloration primaire et la contre-coloration, et peuvent également être utilisés après la fixation ou contenus dans le fixateur et la coloration.
5. Décoloration Tout agent chimique qui peut enlever la couleur de l'objet teint est appelé un décolorant. L'éthanol, l'acétone, etc. sont couramment utilisés comme décolorants. L'agent décolorant peut détecter le degré de stabilité de la combinaison de bactéries et de colorants, qui peut être utilisé pour la coloration différentielle.
6. Contre-coloration Les bactéries ou leurs structures qui ont été décolorées sont souvent contre-colorées avec une solution de contre-coloration pour faciliter l'observation. La couleur de la solution de contre-coloration est différente de celle de la solution de teinture primaire pour former un contraste net. La contre-coloration ne doit pas être trop forte, afin de ne pas masquer la couleur de la coloration initiale.
