Principes de la microscopie à fluorescence et caractéristiques structurelles
La microscopie à fluorescence est l'utilisation d'une efficacité de luminescence élevée du point, grâce à la filtration du système de couleur pour émettre une certaine longueur d'onde de lumière (telle que l'ultraviolet 3650 dans le ou le bleu violet 4200 dans le) comme lumière d'excitation, l'excitation Le matériau fluorescent à l'intérieur de l'échantillon émet une variété de couleurs différentes de fluorescence, puis agrandi à travers l'objectif et les oculaires pour l'observation. De cette façon, dans un fond à fort contraste, même si la fluorescence est très faible, il est facile à identifier, haute sensibilité, principalement utilisé pour l'étude de la structure et de la fonction cellulaire et de la composition chimique. La structure de base d'un microscope à fluorescence est composée d'un microscope optique ordinaire et de quelques accessoires (tels qu'une source de lumière à fluorescence, des filtres d'excitation, un séparateur de faisceau bicolore et des filtres de blocage, etc.). Source de lumière fluorescente - lampe au mercure à ultra haute pression généralement utilisée (50-200 W), qui peut émettre une variété de longueurs d'onde de lumière, mais chaque matériau fluorescent a une longueur d'onde d'excitation de fluorescence la plus forte, il est donc nécessaire d'ajouter des filtres d'excitation (généralement filtre d'excitation ultraviolet, violet, bleu et vert), de sorte que seule une certaine longueur d'onde de la lumière d'excitation passe par l'irradiation des échantillons, tandis que l'autre lumière est absorbée. Il est donc nécessaire d'ajouter un filtre d'excitation (généralement des filtres d'excitation ultraviolets, violets, bleus et verts), de sorte que seule une certaine longueur d'onde de lumière d'excitation traverse l'échantillon, tandis que l'autre lumière est absorbée. Lorsque chaque substance est irradiée avec une lumière d’excitation, elle émet une fluorescence visible d’une longueur d’onde plus longue que celle de la lumière irradiée en très peu de temps. La fluorescence a une spécificité, généralement plus faible que la lumière d'excitation, afin de pouvoir observer la fluorescence spécifique, l'objectif derrière la nécessité d'ajouter un blocage (ou une suppression) doit être sélectionné pour être utilisé.
Différence entre le microscope à fluorescence et le microscope ordinaire
1. La méthode d'éclairage est généralement descendante, c'est-à-dire que la source de lumière est projetée sur l'échantillon à travers l'objectif ;
2. La source de lumière est une lumière ultraviolette, avec une longueur d'onde plus courte et un pouvoir de résolution plus élevé que les microscopes ordinaires ;
3. Il existe deux filtres spéciaux, celui devant la source de lumière est utilisé pour filtrer la lumière visible et celui entre l'oculaire et l'objectif est utilisé pour filtrer la lumière ultraviolette afin de protéger l'œil humain.
Le microscope à fluorescence est également une sorte de microscope optique, la principale différence est que la longueur d'onde d'excitation des deux est différente. Cela détermine la structure du microscope à fluorescence et du microscope optique ordinaire et l'utilisation de différentes méthodes.
Le microscope à fluorescence est l'outil de base pour la cytochimie par immunofluorescence. Il est composé d'une source de lumière, d'un système de plaque filtrante, d'un système optique et d'autres composants majeurs. Il utilise une certaine longueur d'onde de lumière pour stimuler l'échantillon à émettre une fluorescence, qui est agrandie à travers l'objectif et le système d'oculaire pour observer l'image de fluorescence de l'échantillon.
